摘要

脫脂黑水虻蟲粉(DBSFLM)是魚類養(yǎng)殖重要的替代蛋白質(zhì)成分，但其對(duì)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)生長和健康的影響尚不清楚。本研究通過56天的飼養(yǎng)試驗(yàn)，研究了DBSFLM部分替代魚粉對(duì)對(duì)蝦生長性能、身體成分、營養(yǎng)沉積、血液代謝產(chǎn)物、抗氧化和免疫反應(yīng)、消化酶活性及肝臟形態(tài)的影響。實(shí)驗(yàn)使用DBSFLM替代0% (G0)、15% (G15)、30% (G30)、45% (G45)、60% (G60)和80% (G80)的魚粉，配制6種等氮等能飼料。每種飼料隨機(jī)分成4個(gè)重復(fù)組，每箱40尾。對(duì)蝦每天喂食三次，實(shí)驗(yàn)?zāi)┢诓杉簶颖荆治隹寡趸头翘禺愋悦庖呙富钚?。采集肝、胰臟和腸道標(biāo)本，測(cè)定消化酶活性和肝臟形態(tài)。與其他各組相比，G80組的終重、增重和特定生長率較低(p <0.05)，飼料系數(shù)較高(p <0.05)。隨著飼料中DBSFLM的增加，蝦體和肌肉中粗蛋白質(zhì)(CP)和脂質(zhì)沉積均降低(p < 0.05)。G80組血清總膽固醇降低(p < 0.05)，總抗氧化能力提高(p < 0.05); G45-G80組血清丙二醛水平低于G0-G30組(p < 0.05)。肝臟和腸道消化酶活性未受處理的影響(p > 0.05)。G60和G80肝細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的空泡變性、肝小體萎縮和星形管腔丟失。結(jié)果表明，DBSFLM可替代60%的魚粉，且對(duì)對(duì)蝦的生長性能、抗氧化和免疫酶活性及消化酶活性均無不良影響。

前言

黑水虻(Hermetia illucens)是一種很有希望用于動(dòng)物飼料的昆蟲，其幼蟲餌料(BSFLM)具有與魚粉相似的必需氨基酸結(jié)構(gòu)。作為一種潛在的新型蛋白質(zhì)來源，BSFLM在水產(chǎn)飼料中可部分或完全替代魚粉，且不影響魚粉的生長性能。脫脂BSFLM可以分離用于動(dòng)物飼料的昆蟲蛋白和用于飼料和生物燃料的昆蟲油。為了減少生化成分的變化和降低脂質(zhì)氧化的風(fēng)險(xiǎn)，將黑水虻蟲粉加工成富含蛋白質(zhì)的脫脂粕和油餾分已成為一種常見的做法。近年來，脫脂黑水虻蟲粉(DBSFLM)對(duì)大西洋鮭魚(Salmo salar)、虹鱒魚(Oncorhynchus mykiss)、劍鯉(Cyprinus carpio var. Jian)、日本鱸魚(Lateolabrax japonicus)和非洲鯰魚(Clarias gariepinus)的影響得到了很好的評(píng)價(jià)。例如，飼糧中添加DBSFLM可提高日本鱸魚(Lateolabrax japonicus)的抗氧化能力，并通過降低血清脂質(zhì)濃度和上調(diào)脂蛋白脂肪酶和激素敏感脂肪酶的轉(zhuǎn)錄水平，抑制其肝臟脂質(zhì)沉積。

凡納濱對(duì)蝦作為一種具有重要商業(yè)價(jià)值的甲殼類動(dòng)物，在世界上被廣泛養(yǎng)殖，它占世界和中國養(yǎng)殖蝦產(chǎn)量的70%和77%以上。然而，關(guān)于黑水虻蟲粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的影響的信息卻很少。鑒于對(duì)蝦的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，這方面的研究十分必要。因此，本研究旨在研究脫脂黑水虻蟲粉部分替代魚粉對(duì)對(duì)蝦生長性能、體組成、抗氧化和免疫反應(yīng)、消化酶活性及肝臟形態(tài)的影響。

材料與方法

實(shí)驗(yàn)飼料主要蛋白質(zhì)來源為魚粉、脫脂黑水虻幼蟲粉、豆粕、蝦粉和花生糠，主要脂質(zhì)來源為魚油、大豆油和大豆卵磷脂。六個(gè)等氮等能的飼料配方包含約40%粗蛋白和18 KJ / g DM總能量以滿足對(duì)蝦生長的營養(yǎng)需求 (表1)。魚粉的營養(yǎng)成分如下:干物質(zhì)(DM) 91.2%,粗蛋白(CP) 65.9%,粗脂肪(CL) 8.1%,灰分14.6%。在餐廚垃圾底物上飼養(yǎng)的黑水虻幼蟲(8日齡)由廣州Fishtech Biotechnology有限公司提供，成分為DM 93.4%， CP 42.2%， CL 9.1%，灰分18.6%，甲殼素6.8%。黑水虻幼蟲(BSFL)首先在120°C處理20分鐘，碾碎。然后用體積比為2：1的95%乙醇沉淀10分鐘，在通風(fēng)柜下風(fēng)干24小時(shí)，置于-20℃保存直至使用。在基礎(chǔ)飼料中以0% (G0)、15% (G15)、30% (G30)、45% (G45)、60% (G60)和80% (G80)的比例添加DBSFLM替代魚粉，飼料包合量分別為0、58.7、117.5、176.2、234.9和313.2 g/kg。試驗(yàn)飼糧的脂肪酸和氨基酸分布情況分別見表2和表3。

本試驗(yàn)在自然光條件下的室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行。將960尾初始體重為1.1±0.02g的凡納濱對(duì)蝦隨機(jī)分為6組(每組4個(gè)重復(fù))，放入24個(gè)350L、80cm直徑× 70cm高的玻璃纖維圓柱形養(yǎng)殖池中，每個(gè)養(yǎng)殖池40尾。每天3次(08:00、14:00和20:00)投喂至表觀飽足，試驗(yàn)期56天。每天喂食前，將未食用的飼料和糞便吸出。每天記錄每個(gè)水箱的飼糧量，在飼喂1.0 h后將剩余的飼料虹吸出來，分析干物質(zhì)，并從提供的飼料中減去(DM基礎(chǔ))，計(jì)算實(shí)際采食量(FI)。飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，先禁食12h，然后采樣。對(duì)每個(gè)養(yǎng)殖池中的所有蝦進(jìn)行計(jì)數(shù)和稱重，測(cè)量最終體重(FBW)，并計(jì)算增重(WG)、FI、飼料系數(shù)(FCR)和特定生長率(SGR)。每個(gè)水族箱隨機(jī)收集4只蝦，置于-20℃保存，用于蝦體成分分析。用肝素化注射器取蝦的腹竇血樣，室溫保存30 min, 4℃8000g離心10 min。生成的血清立即儲(chǔ)存在- 80°C，用于后續(xù)血清代謝物、抗氧化和非特異性免疫指標(biāo)的測(cè)定。采血后，每個(gè)養(yǎng)殖池隨機(jī)選取6只蝦，采集條件因子(CF)和臟體指數(shù)(VSI)數(shù)據(jù)。另外采集6只蝦的肝胰腺和肌肉樣本，分析肝臟形態(tài)和肌肉組成。每箱取4只蝦的肝胰臟和腸，切碎后均質(zhì)于10體積(w/v)的冰生理鹽水中，4℃6000g離心20min，取上清液置于-20℃保存，用于胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性分析。

結(jié)果

1.生長性能

飼喂G80的對(duì)蝦的FBW、WG、SGR和SR均低于其他各組(p < 0.05)， FCR高于其他各組(p < 0.05)(表4)。各組對(duì)蝦的IBW、FI、CF和VSI均相似(p > 0.05)。

2.機(jī)體組成及養(yǎng)分保留

隨著飼糧DBSFLM的增加，對(duì)蝦全蝦體和肌肉CP降低(p < 0.05)。飼喂G60和G80的蝦全身CP低于飼喂G15-G45的蝦(p < 0.05)，肌肉CP低于飼喂G0-G45的蝦(p < 0.05)。與G0-G45相比，G60和G80的蛋白質(zhì)沉積和脂質(zhì)沉積均較低(p < 0.05)(表5)。

3.血清代謝物、抗氧化和非特異性免疫反應(yīng)

與其他飼料相比，G80組的CHO降低(p < 0.05)， TAOC升高(p < .05)。G45-G80組MDA含量低于G0-G30組(p <0 .05)。處理對(duì)ALB、GLOB、TG、ALT、AST、GLU、UA、SOD、GPx、PO、AKP、ACP和LZM無影響(p > 0.05)(表6)。

4.消化酶活性

各處理對(duì)蝦肝胰臟和腸道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均無影響(p > 0.05)(表7)。

5.肝形態(tài)學(xué)檢查

肝臟形態(tài)見圖1。G0-G45肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，肝小體排列整齊，基膜完整，有星形管腔，吸收細(xì)胞豐富，未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤。

總結(jié)：脫脂黑水虻幼蟲粉可替代60%以下的魚粉，且對(duì)對(duì)蝦的生長性能、抗氧化和免疫酶活性及消化酶活性均無不良影響。

Evaluation of defatted Hermetia illucens larvae meal for Litopenaeus vannamei: effects on growth performance, nutrition retention, antioxidant and immune response, digestive enzyme activity and hepatic morphology[J]. Aquaculture Nutrition, 2021.