研究了黑水虻蟲粉（HM）對白姑魚幼魚的腸道形態(tài)、腸道微生物種群和體液免疫反應(yīng)的影響。為此，對18.0±0.02 g的試驗幼魚分別飼喂：不含HM的對照飼料(CTR)和使用10%、20%和30% HM分別替代17、35和52%的魚粉(FM)的3種飼料(HM10、HM20和HM30)，共飼喂9周。在不同處理組中，大腸(DI)在折疊高度、固有層、粘膜下層寬度和細(xì)胞數(shù)量以及腸上皮細(xì)胞形狀方面沒有顯著的組織形態(tài)學(xué)差異。與CTR和HM10組相比，HM30組中嗜酸性粒細(xì)胞和上皮內(nèi)白細(xì)胞的數(shù)量增加。飼喂HM30的魚的平均DI評分更高，表明與飼喂CTR的魚相比，該組魚的整體組織形態(tài)學(xué)變化趨勢增加。在不同處理組中，無論是外來(食糜)種群還是體內(nèi)(黏膜)種群，腸道細(xì)菌譜(操作分類單位數(shù)量、微生物豐富度、多樣性和相似性指數(shù))均無差異。血漿抗蛋白酶活性隨飼糧中HM水平的增加而升高，但血漿蛋白酶、過氧化物酶、溶菌酶和殺菌活性、一氧化氮和總免疫球蛋白含量無顯著差異。總的來說，為了避免腸道組織形態(tài)學(xué)改變，建議將白姑魚幼魚飼料中HM的含量提高到10%，相當(dāng)于替換17%的FM。

1.216條初始體重18.0±0.02 g的白姑魚幼魚。

2.4種等蛋白質(zhì)(50%)和等脂(19%)的飼料：不含HM的對照飼料(CTR)和使用10%、20%和30% HM分別替代17%、35%和52%的魚粉(FM)的HM10、HM20和HM30。（詳見表1）

1.將216條幼魚隨機分成12個小組，每小組18條。每3個小組為一個處理組，共4個處理組，分別對應(yīng)投喂四種飼料。

2.在溫度調(diào)節(jié)至22.4±0.6℃的循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行飼養(yǎng)，持續(xù)9周。在此期間，每周6天，每天兩次投料，直到目測飽腹。

3.檢測幼魚的腸道，進(jìn)行形態(tài)學(xué)、微生物多樣性和體液免疫參數(shù)分析。

1.腸道形態(tài)分析

對白姑魚大腸的組織學(xué)評估顯示，其折疊高度、固有層、黏膜下層寬度和細(xì)胞數(shù)量正常，與飼糧組成無關(guān)(表2)。隨著飼糧中HM含量的提高，嗜酸性粒細(xì)胞和上皮內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量增加。與CTR和HM10組相比，HM30組的魚的脂肪含量顯著升高(表2; 圖1)。與CTR飼料相比，所有評價參數(shù)的平均分也隨著飼料中HM含量的增加而增加， HM30組中魚的平均分最高。

2.微生物多樣性分析

1）基于DGGE的腸道微生物種群的Bray-Curtis樹形圖顯示(圖2)，外來種群的相似性(<50%)低于原有種群(~55%)。

2）在外來和原有種群中，僅HM20(相似性為75%)和HM10(相似性為85%)飼料出現(xiàn)聚類現(xiàn)象。通過DGGE條帶的存在和nMDS圖進(jìn)一步闡明了(圖3)，食糜樣品中HM10和HM20組之間的營養(yǎng)成分相近。而CTR和HM10兩組對比 (除了其中一組CTR)，粘膜表現(xiàn)出約60%的相似性。但HM30組與其他組都沒有相似性。

3.體液免疫參數(shù)

除血漿抗蛋白酶活性隨飼糧中HM含量的增加而升高外，其他血漿體液免疫參數(shù)均無差異(表5)。試驗中觀察到免疫細(xì)胞浸潤情況，有可能是蟲粉中的幾丁質(zhì)被識別為外來物質(zhì)，但腸道中沒有消化幾丁質(zhì)的活性物質(zhì)，因此無法消化而導(dǎo)致。

總的來說，盡管腸道組織形態(tài)學(xué)的改變很小，但隨著飼糧中HM含量的增加，會誘導(dǎo)局部免疫反應(yīng)，可能促使某些活性物質(zhì)增加。其中，隨飼糧中HM含量的增加而升高的抗蛋白酶（即α-1蛋白酶抑制劑和α-2巨球蛋白），對微生物蛋白酶起作用，從而保護(hù)宿主免受感染。本試驗中，飼糧中添加HM對白姑魚幼魚的腸道菌群多樣性和體液免疫狀態(tài)的影響較小，然而，為了避免過多HM影響到白姑魚幼魚的健康狀況、飼料消化率和生長性能，建議將白姑魚幼魚飼料中HM的含量提高到10%，相當(dāng)于替換17%的FM。

A.Couto, C.R.Serra, I.Guerreiro, F.Coutinho1, C.Castro1, F.Rangel, A.S.Lavrador1, M. Monteiro, R.Santos, H.Peres, P.Pous?o-Ferreira, L.Gasco, F.Gai, A.Oliva-Teles, and P. Enes Black soldier fly meal effects on meagre health condition: gut morphology, gut

microbiota and humoral immune response 

Journal of Insects as Food and Feed, 2022.